Текст работы

Определение примесей в таблетках диазепама и феназепама методом двухступенчатой капиллярной газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием

Определение примесей в фармацевтических препаратах является важной и актуальной задачей, так как состав примесей определяет качество продукта и позволяет судить о производителе продукции и ее фальсификации, которая принимает все большие масштабы во всех странах мира. Необходимо также отметить, что в ряде случаев примеси, присутствующие в препарате в следовых концентрациях, по своей токсичности намного превосходят токсичность основного компонента.
Одно из ведущих мест в анализе фармацевтических препаратов на содержание органических примесей (как правило, заданных) занимает высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). При обнаружении и определении неизвестных примесей возможности этого метода весьма ограничены. УФ-детектор с диодной матрицей, как наиболее селективный, часто используется при определении заданных примесей в фармацевтических препаратах, однако для идентификации неизвестных примесей в фармацевтических препаратах данный детектор использован не был. Принципиально диодно-матричный детектор может быть использован для этой цели путем сравнения спектра со спектром библиотеки, однако УФ-спектры не так характеристичны, как масс-спектры, и после идентификации соединения по УФ-спектру ее необходимо подкрепить применением таких методов как ГХ/МС или ВЭЖХ/МС. Сочетание ВЭЖХ с масс- спектрометрией (МС) используют в большинстве случаев для подтверждения известных (заданных) примесей, присутствующих в фармацевтической продукции. Возможности такого сочетания для идентификации неизвестных примесей весьма ограничены; это обусловлено возможностью потери информации о ряде компонентов смеси из-за различных ион-молекулярных реакций примесей в элюенте, а также регистрацией только молекулярных масс компонентов смесей (когда это возможно). В ряде случаев для идентификации примесей используют выделение соответствующих фракций, их концентрирование с заменой растворителя и последующую регистрацию спектров ядерного магнитного резонанса (ЯМР) (если это возможно - в связи с низкой чувствительностью метода ЯМР). Помимо ВЭЖХ, для контроля содержания заданных примесей в фармацевтической продукции используют высокоэффективную тонкослойную хроматографию и реже газовую (ГХ), сверхкритическую флюидную хроматографию и капиллярный электрофорез. Каждый из этих методов имеет определенные преимущества перед ВЭЖХ, однако их ограничениями являются селективность, эффективность, емкость колонки и чувствительность детектора.
Для большинства термостабильных летучих и среднелетучих соединений идентификация примесей наиболее легко и эффективно обеспечивается использованием сочетания капиллярной газовой хроматографии с масс-спектрометрией (ГХ/МС). Одним из возможных методов, позволяющих одновременно снизить предел обнаружения примесей и улучшить чувствительность, эффективность и селективность анализа, является метод двухступенчатой off-line капиллярной газовой хроматографии (КГХ) в сочетании с масс-спектрометрией.
Известно, что бензодиазепины, в том числе диазепам и феназепам, удовлетворяют требованиям метода ГХ/МС по своей летучести и термостабильности. В частности, их метаболизм и фармакокинетика были успешно изучены методами ГХ и ГХ/МС.
В связи с этим целью настоящей работы являлось изучение возможности определения примесей в таблетированной форме рассматриваемых фармацевтических препаратов с использованием двухступенчатой КГХ в сочетании с масс-спектрометрическим детектированием в режиме off-line.

Экспериментальная часть

В качестве объектов исследования были выбраны два фармацевтических препарата в таблетированной форме, активными веществами которых являлись диазепам (7-хлор-2,3-дигидро-1-метил-5-фенил-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он) и феназепам (7-бром-5-(орто- хлорфенил)-2,3-дигидро-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он).
Для приготовления рабочего раствора диазепама одну таблетку (с содержанием активного компонента 5 мг) растирали в порошок в ступке. Порошок растворяли в 6 мл ацетонитрила, при растворении использовали активацию ультразвуковым полем в течение 30 мин. Затем раствор центрифугировали 15 мин со скоростью 5000 об/мин. Жидкость над осадком сливали и для получения более концентрированного раствора 2,0 мл полученного раствора упаривали в токе азота при комнатной температуре до 200 мкл.
Для приготовления рабочего раствора феназепама пять таблеток (с содержанием активного компонента 0,5 мг) растирали в порошок в ступке. Далее феназепам извлекали 6 мл ацетонитрила по той же методике, которая описана для извлечения диазепама. Для холостых опытов 2,0 мл растворителя - ацетонитрила - упаривали до 200 мкл.
Первую ступень двухступенчатой КГХ в режиме off-line с концентрированием примесей осуществляли с использованием газового хроматографа "DANI 6500" с пламенно-ионизационным детектором (ПИД). Разделение проводили на капиллярной кварцевой колонке 0,5 м х 0,32 мм х 1 мкм с неподвижной фазой RTX-5 фирмы Restec (США). Режим программирования температуры колонки: 50° С (3 мин) → 30°/мин → 250 °С (6 мин). Температура испарителя хроматографа составляла 250 °С, температура ПИД - 250 °С. Колонку к детектору и инжектору присоединяли без поддува и сброса потока. В качестве газа-носителя использовали водород со скоростью потока 5 мл/мин. Для сбора и обработки хроматографических данных использовали программное обеспечение "Chrom - Card" для Windows 3.1 Server Ver. 1.1.
Концентрирование примесей осуществляли на сорбционном картридже, подключенном к выходу капиллярной колонки (см. рисунок).
Картридж представлял собой металлическую трубку длиной 4 см и внутренним диаметром 3 мм, наполненную тенаксом (длина слоя 1,6 см) и хромосорбом W с 15 % SE-30 (длина слоя 1,6 см). Зоны сорбентов внутри трубки отделялись друг от друга кварцевой ватой. Улавливание веществ проводили при потоке газа-носителя, направленном от слоя хромосорба W с 15 % SE-30 к слою тенакса.
Для концентрирования примесей на первой ступени двухступенчатой КГХ в режиме off-line использовали систему, представленную на рисунке.



Схема установки для двухступенчатой off-line КГХ: ( 1, 10 - вентиль «открыт/закрыт»; 2 - кран тонкой регулировки; 3 - манометр; 4 -инжектор хроматографа; 5 - ГХ колонка; 6 - термостат ГХ; 7 - тройник; 8 - ПИД; 9 - сорбционный катридж).
На конце разделительной колонки был установлен тройник (7), позволяющий направлять поток газа-носителя на сорбционный картридж (9) и частично ПИД (при открытом вентиле 10) или полностью через ПИД (8) (при закрытом вентиле 10). Примеси на сорбционном картридже концентрировали по следующей схеме. Отбирали 5 мкл рабочего раствора и вводили его непосредственно в инжектор ГХ, при этом вентиль 10 был открыт. Для сброса основной части активного компонента (диазепама или феназепама) вентиль 10 закрывали после начала выхода пика основного компонента, а после окончания его выхода открывали (с 7,5 по 12,4 мин при анализе раствора диазепама и с 8,4 по 12,4 мин при анализе раствора феназепама). Эту операцию повторяли два раза. Начало и конец выхода пика основного компонента определяли в предварительном опыте.
Для определения сконцентрированных примесей на второй ступени использовали систему ГХ/МС (газовый хроматограф фирмы "Varian" (США) модели 3400 с масс-спектрометрическим детектором "Incos 50" фирмы "Finnigan МАТ" (США) в режиме ионизации электронным ударом). Для перевода адсорбированных соединений в капиллярную колонку ГХ картридж с помощью иглы соединяли с испарителем хроматографа и осуществляли термодесорбцию, нагревая картридж потоком горячего воздуха (250 °С), при этом поток газа-носителя пропускали через картридж в направлении, обратном направлению потока при улавливании.
Термодесорбированные примеси разделяли на капиллярной кварцевой колонке 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм с неподвижной фазой CPSil 24 СВ. Режим программирования температуры колонки: 50 °С (10 мин) → 10°/мин → 290 °С (20 мин). Температура испарителя хроматографа составляла 270 °С. Пробу вводили в режиме без деления потока. В качестве газа-носителя использовали гелий со скоростью потока 1,5 мл/мин. Температура переходной линии составляла 260 °С, температура источника ионов - 180 °С, энергия электронов - 70 эВ, диапазон сканируемых масс от 50 до 500 а.е.м., скорость сканирования - 2 скан/с.
До определения примесей в исследуемых образцах методом двухступенчатой off-line КГХ/МС сначала регистрировали примеси без концентрирования, вводя пробу (1 мкл) рабочего раствора непосредственно в инжектор хроматомасс-спектрометра. Примеси определяли в условиях, описанных для второй ступени. Предварительно провели холостой опыт, проанализировав 1 мкл ацетонитрила, упаренного в 10 раз, в тех же условиях. При обработке хроматомасс-спектрометрических данных учитывали результаты холостого опыта. Холостым опытом при определении примесей методом двухступенчатой off-line КГХ/МС являлся предварительно проведенный анализ ацетонитрила, упаренного в 10 раз, в условиях двухступенчатой offline КГХ/МС.
Для обработки хроматомасс-спектрометрических данных использовали программное обеспечение GCQ версии 2.2. Неизвестные примеси идентифицировали сравнением масс-спектра неизвестного соединения с базой данных NIST (National Institute of Standards and Technology, USA). Отнесение спектра к определенной структуре считали достоверным, если значения коэффициентов сходимости при прямом и обратном библиотечном поиске были больше 700.
Содержание примесей оценивали с использованием метода внешнего стандарта - раствора нафталина-d8 с концентрацией 1 • 10 -8 г/мкл. Проводили 6 параллельных опытов, относительное стандартное отклонение при определении примесей составило не более 0,25.

Результаты и их обсуждение

Данные по определению примесей в диазепаме и феназепаме методом хроматомасс-спектрометрии представлены, соответственно, в табл. 1 и 2.

Таблица - Примеси, определенные в препарате диазепама при прямом вводе 1 мкл раствора препарата в хроматомасс-спектрометр, и оценка их содержания в таблетке (n = 6; Р = 0,95; Sr ≤0,25)

tR	Масс-спектр m/z (lотн)*	Название	Формула	Молекулярная масса, г/моль (Mr)	Оценка содержания, %
14,11	154(100), 153(39), 152(28), 151(10), 76(30), 63(12)	бифенил	С12Н10	154	0,003
21,25	206(58), 205(100), 151(11), 121(20), 76(30), 57(9)	1-фенил-фталазин	С14H10N2	206	0,004
22,47	241(40), 239(93), 205(100), 110(28), 75(53)	неизвестная примесь	-	-	0,06

* - здесь и далее масс-спектры приведены в следующей форме: молекулярный ион (если он наблюдается), пять наиболее интенсивных ионов в спектре в порядке убывания значений массовых чисел ионов (для изотопных галогенсодержащих ионов приведены пики только 35Cl и 79Br-содержащих ионов)

Таблица - Примеси, определенные в препарате феназепама при прямом вводе 1 мкл раствора препарата в хроматомасс-спектрометр, и оценка их содержания в таблетке (n = 6; Р = 0,95; Sr ≤0,25)

tR	Масс-спектр m/z (lотн)	Название	Формула	Молекулярная масса, г/моль (Mr)	Оценка содержания, %
20,13	208(31), 192(24), 104(22), 92(100), 91(62)	неизвестная примесь	-	-	0,002
21,25	206(40), 205(100), 121(12), 89(23), 75(51), 57(21)	1-фенил-фталазин	С14H10N2	206	0,006
22,47	240(52), 239(90), 205(100), 75(59), 51(36)	неизвестная примесь	-	-	0,01
24,25	141(100), 119(32), 115(20), 83(48), 77(22)	неизвестная примесь	-	-	0,002
27,24	270(66), 256(100), 221(36), 165(29), 110(13), 77(45)	7-хлор-2,3-дигидро-1-метил-5-фенил-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он (диазепам)	C16H13ClN2O	284	0,3
27,47	270(66), 241(96), 235(100), 208(70), 103(39), 75(74)	5-(2-хлорфенил)-1,3-дигидро-2Н-1,4 -бензодиазепин-2-он	C15H11ClN2O	270	0,006
30,15	348(38), 321(65), 282(30), 102(63), 89(76), 75(100)	неизвестная примесь	-	-	0,01

Как видно из приведенных данных, в препарате диазепама было зарегистрировано только три примеси на уровне 10-3 - 10-2 %, из них идентифицированы две примеси, а в препарате феназепама - 7 примесей на уровне 10 -3 - 10 -5 %, из них идентифицированных - 3.
Результаты обработки данных по определению сконцентрированных примесей в таблетках диазепама и феназепама методом двухступенчатой off-line КГХ представлены соответственно в табл. 3 и 4.

Таблица - Примеси, определенные в препарате диазепама двухступенчатой КГХ/МС в варианте off-line, и оценка их содержания в одной таблетке (n = 6; Р = 0,95; Sr ≤0,25)

tR	Масс-спектр m/z (lотн)	Название	Формула	Молекулярная масса, г/моль (Mr)	Оценка содержания, %
8,15	134(22), 119(14), 106(16), 105(100), 91(12), 77(19)	1 -метил-3-пропилбензол	С10Н14	134	0,001
10,36	132(39), 117(17), 104(100), 91(35), 77(23), 65(11)	1,2,3,4-тетрагидронафталин	С10Н12	132	0,0002
10,47	136(35), 64(58), 61(32), 60(100), 59(33), 55(29)	[1,4,5]-оксадитиепан	C4H8OS2	136	0,006
11,37	132(100), 163(8), 155(5), 88(45), 73(8)	Неизвестная примесь	-	-	0,004
14,10	154(100), 153(41), 152(25), 151(18), 76(25), 63(13)	Бифенил	С12Н10	154	0,004
14,55	191(75), 168(100), 167(75), 152(19), 73(41)	Неизвестная примесь	-	-	0,0001
15,37	168(100), 167(53), 152(20), 148(15), 56(13)	Неизвестная примесь	-	-	0,00007
15,42	194(21), 163(100), 135(29), 120(9), 103(17), 76(28)	Диметиловый эфир 1,3-бензолдикарбоновой кислоты	С10Н10О4	194	0,009
15,59	154(22), 153(100), 126(16), 98(28), 57(60)	Неизвестная примесь	-	-	0,0001
16,07	156(84), 155(48), 128(100), 127(98), 126(34), 63(18)	1-нафталин-карбоксальдегид	C11H8O4	156	0,001
16,20	170(100), 155(97), 119(70), 71(27), 57(43)	Неизвестная примесь	-	-	0,00009
16,25	196(23), 181(20), 153(100), 74(9), 73(43)	Неизвестная примесь	-	-	0,001
17,07	185(32), 183(100), 154(33), 92(98), 73(28)	Неизвестная примесь	-	-	0,0003
17,10	170(22), 166(73), 165(100), 163(31), 155(25)	Неизвестная примесь	-	-	0,0004
17,22	181(97), 138(96), 110(95), 75(100), 74(73)	Неизвестная примесь	-	-	0,0003
17,26	169(100), 168(28), 167(30), 115(10), 73(27), 51(30)	2-n-толилпиридин	C12H11N	169	0,002
21,23	206(52), 205(100), 151(14), 121(18), 76(29), 57(15)	1 -фенил-фталазин	c14h10n2	206	0,005
22,26	303(100), 110(17), 97(15), 57(58), 54(17)	Неизвестная примесь	-	-	0,003
22,47	241(40), 239(93), 205(100), 75(53), 69(17)	Неизвестная примесь	-	-	0,09
23,03	255(39), 254(60), 253(100), 219(95), 110(37)	Неизвестная примесь	-	-	0,0008
23,12	245(78), 228(36), 193(33), 168(17), 105(36), 77(100)	5-хлор-2-(метиламин)бензофенон	С14Н12ClNO	245	0,03
23,25	284(21), 243(26), 94(100), 69(20), 55(39)	Неизвестная примесь	-	-	0,0004
23,50	286(32), 285(47), 284(31), 283(40), 205(100)	Неизвестная примесь	-	-	0,007
24,21	259(27), 257(80), 230(26), 228(50), 222(100)	Неизвестная примесь	-	-	0,0007
25,36	250(64), 249(85), 222(100), 221(42), 91(27), 77(37)	1,3-дигидро- 1-метил-5-фенил-2Н-1,4-бензодиазепин-2-он	c16h14n2o	250	0,03
26,24	316(8), 284(57), 241(100), 228(75), 222(82), 209(39)	7-хлор-2,3-дигидро-2-гидрокси-1-метил-2-метокси-5-фенил-1Н-1,4- бензодиазепин	c17h17Cln2o2	316	0,002
28,35	270(71), 242(100), 214(18), 178(14), 151(21), 103(40)	7-хлор-1,3-дигидро-5-фенил-2Н-1,4-бензодиазепин-2-он	c15h11cin2o	270	0,004
30,38	284(100), 268(13), 248(11), 206(18), 151(8), 124(14)	7-хлор-2-метокси-5-фенил-ЗН-1,4-бензодиазепин	c16h13cln2o	284	0,0008

Таблица - Примеси, определенные в препарате феназепама двухступенчатой КГХ/МС в варианте off-line, и оценка их содержания в одной таблетке (n = 6; Р = 0,95; Sr ≤0,25)

tR	Масс-спектр m/z (lотн)	Название	Формула	Мол. масса, г/моль (Mr)	Оценка содержания, %
10,50	137(100), 110(4), 102(46), 83(17), 75(34), 58(56)	2-хлорбензонитрил l	c7h4cln	137	0,0003
16,09	156(80), 128(100), 127(25), 126(65), 102(13)	Неизвестная примесь	-	-	0,00007
16,26	196(31), 181(32), 154(46), 153(100), 57(85)	Неизвестная примесь	-	-	0,00006
17,31	184(7), 169(100), 168(54), 167(27), 115(11), 51(19)	1,1 -дифенил-гидразин	c12h12n2	184	0,00009
20,13	246(13), 243(9), 92(100), 91(70), 78(8), 60(11)	Додецил-бензол	C18H30	246	0,001
20,28	110(10), 82(61), 68(43), 57(100), 55(81)	Тетрадеканаль	c14h38o	212	0,007
21,25	206(44), 205(100), 177(10), 151(15), 76(28), 60(37)	1 -фенил-фталазин	c14h10n2	206	0,008
21,40	129(18), 97(21), 85(19), 57(100), 55(80)	Неизвестная примесь	-	-	0,005
21,57	270(23), 73(99), 71(45), 60(100), 57(99), 55(87)	Гептадекановая кислота	C17H34O2	270	0,007
22,48	241(45), 239(87), 205(100), 110(22), 75(40)	Неизвестная примесь	-	-	0,009
23,46	275(53), 195(28), 105(48), 91(25), 77(100), 51(44)	5-бром-2-аминобензофенон	C13H10BrNO	275	0,0002
23,54	285(47), 205(100), 177(13), 103(16), 75(29)	Неизвестная примесь	-	-	0,001
24,27	276(16), 150(16), 141(100), 115(12), 55(15)	Неизвестная примесь	-	-	0,002
25,08	311(100), 276(93), 195(64), 139(75), 75(60)	Неизвестная примесь	-	-	0,002
26,05	133(10), 100(17), 87(100), 77(34), 72(15)	Неизвестная примесь	-	-	0,0006
26,17	236(77), 235(91), 208(100), 207(89), 180(31), 77(57),	1,3-дигидро-5-фенил-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он	c15h12n2o	236	0,004
27,27	284(60), 256(100), 221(30), 165(22), 110(20), 103(17)	7-хлор-2,3-дигидро-1-метил-5- фенил-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он (диазепам)	c16h13c l n2o	284	0,4
27,50	270(73), 241(88), 235(100), 207(32), 178(21), 103(45)	5-(2-хлорфенил)-1,3-дигидро-2Н- 1,4-бензодиазепин-2-он	c15h11c l n2o	270	0,008
28,12	308(100), 306(72), 227(8), 192(32), 164(17), 63(33)	2-[n-бромфенил]-5-хлорбензими- дазол	C13H8BrClN2	306	0,00007
28,46	335(100), 333(75), 254(28), 219(27), 75(60)	Неизвестная примесь	-	-	0,00006
29,06	323(100), 321(78), 294(48), 258(50), 242(48)	Неизвестная примесь	-	-	0,006
29,16	307(100), 305(73), 211(42), 209(50), 163(23)	Неизвестная примесь	-	-	0,004
30,18	304(90), 275(100), 269(80), 241(33), 138(25), 120(30)	7-хлор-5-(2-хлорфенил)-1,3-дигидро-2Н-1,4-бензодиазепин-2-он	C15h10Cl2N2O	304	0,0004
30,24	348(40), 321(50), 313(28), 102(60), 89(80), 75(100)	Неизвестная примесь	-	-	0,03
30,30	314(67), 286(100), 207(30), 179(26), 151(22), 103(74)	7-бром-2,3-дигидро-5-фенил-1Н- 1,4-бензодиазепин-2-он	C15H11BrN2O	314	0,003
35,04	392(18), 365(47), 313(69), 103(80), 89(79), 75(100)	7-бром-5-(3-бромфенил)-2,3-дигидро-1Н-1,4-бензодиазепин-2-он	C15H10Br2N2O	392	0,00007

феназепам диазепам хроматография
В диазепаме определено 28 примесей на уровне 10-4 - 10-2 %, оценка суммарного содержания которых составила около 0,2 %. В феназепаме определено 26 примесей на уровне 10-4 - 10-1 %, и оценка их суммарного содержания составила около 0,5 %. Таким образом, с использованием предложенного метода двухступенчатой КГХ в режиме off-line можно определять значительно большее число примесей и на более низком уровне по сравнению с прямым ГХ/МС определением.
В Фармакопее США регламентированы следующие примеси в диазепаме: 5-хлор-2-(метиламин)бензофенон (не более 0,01 %), 3-амино-6-хлор-1-метил-4-фе- нилкарбостирил (не более 0,1 %) и 7-хлор-1,3-дигидро-5-фенил-2Н-1,4-бензодиазепин-2-он (не более 0,3 %). Как видно из данных, представленных в табл. 1 и 3, ни одна из регламентированных примесей не была определена при прямом вводе в ГХ/МС и две из регламентированных примесей были определены двухступенчатой off-line КГХ/МС на уровне 0,03 % и 0,004 %.
Можно предположить, что часть определенных примесей, не относящихся к классу бензодиазепинов, возможно, связана с наличием наполнителей в таблетках или является продуктами деструкции в процессе концентрирования и термодесорбции с картриджа. Известно, что, в качестве вспомогательных веществ в таблетках диазепама и феназепама могут быть использованы такие вещества, как глюкоза, сахар, крахмал, лактоза, стеариновая кислота, метилцеллюлоза, карбоксицеллюлоза, аэросил, тальк, полиэтилоксид и другие вещества. По-видимому, идентифицированные примеси, приведенные в табл. 1 - 4, не характерны как для самих перечисленных наполнителей (большая часть которых удаляется в процессе пробоподготовки), так и продуктов их возможной деструкции. Часть неидентифицированных примесей может относиться к наполнителям таблеток. Доказательством отсутствия деструкции примесей и основных веществ в процессе концентрирования и термодесорбции с картриджа является наличие четких хроматографических пиков, соответствующих этим веществам, на хроматограммах, зарегистрированных как для растворов этих веществ при прямом вводе в ГХ/МС, так и для десорбированного содержимого картриджа. Кроме того, об отсутствии термодеструкции примесей при термодесорбции свидетельствует примерно одинаковое содержание одних и тех же примесей в препарате, зарегистрированных до и после концентрирования. Отдельно следует отметить следующий факт: среди примесей, определенных методом двухступенчатой КГХ/МС, есть ряд веществ, содержание которых оценено на относительно высоком уровне (10-3-10-2 %), но в то же время, эти примеси не определены при прямом вводе в хроматомасс-спектрометр. Это может быть, во-первых, обусловлено различной чувствительностью масс-спектрометрического детектора (МСД) к разным веществам, а также разной формой хроматографических пиков при содержании примеси на уровне 10-4-10-3% (до концентрирования) и на уровне 10-3-10-2% (после концентрирования). В первом случае пик может быть более размытым и иметь меньшую высоту и, следовательно, не быть различимым МСД, а после концентрирования он становится более четким и легко различимым.
Таким образом, с использованием метода, основанного на двухступенчатой КГХ в режиме off-line в сочетании с масс-спектрометрическим детектированием, определены примеси в таблетированной форме фармацевтических препаратов, активными веществами которых являлись диазепам и феназепам. В препарате диазепама зарегистрировано 28 примесей на уровне 10-4-10-2% (из них идентифицировано 13), в то время как при прямом вводе пробы в инжектор хроматомасс-спектрометра обнаружено только 3 примеси на уровне 10-3- 10-2%. В препарате феназепама зарегистрировано 26 примесей на уровне 10-4 - 10 -1 % (из них идентифицировано 14), а при прямом вводе пробы обнаружено 7 примесей на уровне 10-3-10-1%. Оценка суммарного содержания всех зарегистрированных примесей в случае диазепама составила около 0,2 %, в случае феназепама - около 0,5 %.